Тест для выявления генетических мутаций у пациентов, перенесших LASIK
Лаборатория Авеллино США запускает Avellino DNA Dual Test для определения безопасности LASIK. Тест может обнаружить генетические мутации, вызывающие послеоперационные осложнения.
Этот тест, который внедряется Американским обществом катаракты и рефракционной хирургии, предназначен для обнаружения дистрофии роговицы Авеллино (ACD) и гранулярной дистрофии роговицы 1 типа (GCD1).
При GCD1 в слоях роговицы постепенно образуются небольшие полупрозрачные гранулы. Пациенты с GCD1, которым проводится LASIK, LASEK или ФРК, подвергаются повышенному риску потери зрения.
Тест может определить GCD1 или ACD, также известную как GCD2, у пациентов, которым планируется выполнить LASIK, и помочь им избежать послеоперационных зрительных осложнений.
Для проведения теста при помощи тампона берется проба изо рта пациента, чтобы определить, имеется ли у него генная мутация GCD1 или GCD2. Офтальмолог берет 10 проб с внутренней стороны каждой щеки, чтобы получить подходящий образец, который отсылается в Лабораторию Авеллино США, сертифицированную в качестве лаборатории тестирования методов молекулярной диагностики. Результаты направляются врачу в течение 24 - 48 часов.
Генетика и ICSI: генетическое обследование пациентов в программах IVF (кариотипирование, определение делеций Y-хромосомы, мутаций CFTR-гена)
15:40 Администратор
Генетика и ICSI: генетическое обследование пациентов в программах IVF (кариотипирование, определение делеций Y-хромосомы, мутаций CFTR-гена)
Мужской фактор в структуре бесплодного брака составляет по разным данным от 30 до 50%. В связи с этим перед каждым врачом, занимающимся мужским половым здоровьем, встает вопрос о диагностике причин и последующем лечении пациентов с патоспермией.
Классический метод ЭКО, вошедший в историю репродуктивной медицины как один из наиболее эффективных способов лечения различных форм женского бесплодия, имеет весьма ограниченное применение в случаях лечения бесплодных пар с выраженным мужским фактором, связанным с низкими количественными и качественными показателями спермограммы. Поэтому проводился поиск подходов, позволяющих оплодотворить яйцеклетку при использовании «плохой» спермы. Вначале ставки делались на частичное рассечение зоны пеллюцида (PZD, от англ. partial zona dissection) и субзональнаю инъекция сперматозоидов в перивителлиновое пространство (SUZI, от англ. subzonal insertion). Однако эти методы не доказали свою эффективность.
Наконец, методом, позволившим достичь высокой эффективности лечения стал ИКСИ (ICSI) - от англ. Intra Cytoplasmic Sperm Injection - «Введение сперматозоида в цитоплазму ооцита». Процедура ИКСИ как правило выполняется при выраженном мужском факторе бесплодия, связанном со снижением оплодотворяющей способности сперматозоидов. Этот метод обеспечивает проникновение в яйцеклетку сперматозоида, предварительного отобранного по морфологическим и другим характеристикам. Первое сообщение об успешном наступлении беременности после применения метода ИКСИ появилось в 1992 году в журнале Lancet, а в 1993 - опубликована статья о рождении первых детей зачатых с помощью этого метода.
Показания к проведению ИКСИ:
Дополнительно: п оказания к хирургическому получению сперматозоидов :
Противопоказанием для хирургического получения сперматозоидов являются острые инфекционные заболевания любой локализации.
Осложнения при хирургическом получении сперматозоидов:
- гематомы мошонки или интратестикулярные гематомы;
- инфицирование операционной раны.
СПОСОБЫ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ЭКСТРАКЦИИ СПЕРМАТОЗОИДОВ
Понятие "рак" объединяет более 100 различных заболеваний, основной характеристикой которых является неконтролируемое и ненормальное деление клеток. Скопление этих клеток образует патологическую ткань, называемую опухолью. Некоторые формы рака, такие, например, как рак крови, не образуют опухолевую массу. Опухоли бывают доброкачественные (нераковые) или злокачественные (раковые). Доброкачественные опухоли могут расти, но они не способны распространяться в отдаленные части организма и обычно не угрожают жизни пациента. Злокачественные опухоли в процессе своего роста проникают в окружающие органы и ткани и способны распространяться с током крови и лимфы в отдаленные части организма (метастазировать).
Некоторые разновидности злокачественных опухолей могут поражать лимфатические узлы. Лимфатические узлы в норме представляют собой крошечные структуры, имеющие форму фасолевого боба. Их основной функцией является фильтрация проходящего через них потока лимфы и её очищение, что имеет огромное значение в функционировании иммунной защиты организма. Лимфатические узлы располагаются в виде скоплений в различных частях организма. Например, на шее, подмышечной и паховых областях. Злокачественные клетки, отделившиеся от опухоли, могут путешествовать по организму с током крови и лимфы, оседая в лимфоузлах и других органах и давая там начало новому опухолевому росту. Этот процесс и называется метастазированием. Метастатическую опухоль называют по имени того органа, где она зародилась, например, если рак молочной железы распространился на ткань легкого, то его называют метастатическим раком молочной железы, а не раком легкого.
После заболеваний сердечно-сосудистой системы, рак является 2-ой по частоте причиной смерти в развитых странах. Средний показатель 5-летней выживаемости после установления диагноза "рак" (вне зависимости от локализации) в настоящее время составляет около 65%.
Наиболее часто встречающимися видами раковых опухолей, если не учитывать широко распространенные в пожилом возрасте базальноклеточный и сквамозный рак кожи, являются: рак молочной железы, простаты, легких и толстого кишечника.
Не смотря на то, что в различных странах частота встречаемости отдельных вариантов опухолей несколько отличается, но практически повсеместно в развитых странах рак легких, толстого кишечника, молочной и поджелудочной железы, а также рак простаты - 5 наиболее распространенных причин смерти от рака.
К "факторам риска" относят любые обстоятельства, которые повышают вероятность развития заболевания у определенного человека. Hекоторые факторы риска возможно контролировать, такие, например, как курение табака или определенные инфекции. Другие факторы риска, такие как возраст или принадлежность к определенной этнической группе, контролю не поддаются.
Наличие факторов риска может помочь доктору выявить пациентов, имеющих повышенный риск развития той или иной формы рака.
Резюме. Определены частота и спектр мутаций в кодонах 12 и 13 гена KRAS у 131 пациента с колоректальным раком (КРР). Мутации KRAS выявлены у 56 больных (42,7%). Данные о частоте и спектре мутаций у больных КРР в Украине не отличаются от результатов генотипирования в исследованиях других авторов. Мутации гена KRASпри КРР в Украине встречаются чаще у женщин, чем у мужчин.
Колоректальный рак (КРР) является одной из наиболее распространенных злокачественных опухолей в мире и второй по частоте причиной смерти от рака в странах Европы [1, 2, 9]. В последние годы многообещающими стали результаты лечения КРР при использовании моноклональных антител (МКАТ) против рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR). Препараты панитумумаб и цетуксимаб продемонстрировали высокую эффективность в монорежиме и в комбинации с оксалиплатином и иринотеканом при назначении в первой и во второй линии терапии больных метастатическим КРР [7, 8]. Предпосылкой к разработке препаратов явилось то, что EGFR гиперэкспрессирован в 50–80% случаев КРР, а его блокировка тормозит пролиферативную активность, адгезию, ангиогенез, миграцию и сокращает выживаемость опухолевых клеток [15]. Однако оказалось, что только у части пациентов (8–23%) отмечается желаемый эффект от лечения МКАТ, а уровень экспрессии EGFR опухолевыми клетками не коррелирует с ответом на терапию и не может использоваться как предикторный маркер ее эффективности [10, 12]. Установлено, что неудачи лечения предопределяют мутации гена KRAS. при которых происходит EGFR-независимая активация внутриклеточного сигнального пути, делающая бесполезной блокировку самого рецептора [6].
Мутации KRAS выявляют в 35–45% случаев КРР [3]. К настоящему времени описано свыше 3000 точечных мутаций гена в клетках опухолей. Приблизительно 82 и 17% всех описанных мутаций KRAS обнаруживают в кодонах 12 и 13 соответственно. Проведенный анализ клинических данных свидетельствует, что только 3% больных КРР с наличием мутации KRAS в опухолевых клетках отвечают на лечение анти-EGFR МКАТ, в то время как у пациентов, опухоли которых экспрессируют нормальный (дикий) тип гена, этот показатель достигает 33% [13]. По этой причине определение мутационного статуса гена KRAS у больных КРР является ключевым моментом в планировании и прогнозировании ответа на таргетную терапию панитумумабом и цетуксимабом. Американское общество клинической онкологии и Европейское медицинское агентство одобрили и рекомендуют использование анти-EGFR МКАТ для лечения метастатического КРР исключительно у пациентов без мутации гена KRAS [4, 6].
Целью настоящего исследования было определить частоту и спектр мутаций гена KRAS у больных КРР в Украине.
Материалы и методы
Объектом исследования были 139 образцов опухоли больных КРР, которых лечили или направляли на диагностику в Киевский городской клинический онкологический центр. Для исключения ошибки отбора в исследование включили всех пациентов с КРР, направленных на тестирование мутационного статуса гена KRAS в отдел медицинской генетики ГУ «Национальный научный центр радиационной медицины НАМН Украины» на протяжении 2010–2012 гг. Среди пациентов — 35 мужчин и 104 женщины. Средний возраст составил 63,2 года.
Исследовали опухолевую ткань, полученную от пациентов при проведении оперативного вмешательства, фиксированную формалином и залитую в парафиновые блоки. Парафиновые блоки нарезали для получения 3–6-серийных срезов ткани толщиной 5–10 мкм и фиксировали на стеклах. Один из срезов окрашивали гематоксилин-эозином для патогистологической оценки и маркировки зон локализации опухолевых клеток. После депарафинизации в ксилоле проводили микро- или макродиссекцию 2–4 срезов ткани для получения суспензии клеток, содержащей не менее 70% опухолевых. ДНК выделяли с помощью наборов QIAamp DNA minikit (Qiagen, Германия) и Nucleospin Tissue DNA Mini-Kit (Duren, Германия) в соответствии с рекомендациями производителей. Мутационный статус гена KRAS изучали путем амплификации мутантной последовательности ДНК в присутствии супрессора нормальной аллели с одновременной маркировкой продукта полимеразной цепной реакции биотином c последующей избирательной гибридизацией специфического биотинилированного продукта на олигонуклеотидные пробы стрип-теста (KRAS StripAssay, ViennaLab, Австрия) в соответствии с рекомендациями производителя. Метод позволяет определить мутации, локализированные в 12-м (р.Gly12Ala, р.Gly12Arg, р.Gly12Asp, р.Gly12Cys, р.Gly12Ile, р.Gly12Leu, р.Gly12Ser, р.Gly12Val) и 13-м (р.Gly13Asp, р.Gly13Cys) кодонах 2-го экзона гена KRAS .
Статистические расчеты проводили с помощью программного пакета Statistica 5.5 (StatSoft, США). Данные оценивали с использованием критерия Фишера в двухстороннем варианте. Разницу между показателями оценивали как значимую при р<0,05.
Из 139 образцов опухоли мутационный статус гена KRAS удалось проанализировать в 131 случае. В 8 случаях (5,8%) трехкратные попытки выделения и амплификации ДНК были безуспешными, что с наибольшей вероятностью обусловлено деградацией и химической модификацией ДНК клеток опухоли во время предшествующей гистологической проводки. Из 131 случая, в которых определение мутационного статуса KRAS было возможным, наличие мутаций в 12-м и 13-м кодонах гена выявлено в 56 (42,7%). В спектре определенных мутаций наиболее частой (35,7%, 20 из 56 больных с мутацией) оказалась замена глицина на аспартат в 12-м кодоне (р.Gly12Asp). Далее, по частоте представления, мутации расположились следующим образом: р.Gly12Val — 30,4% (17 из 56 больных с мутацией), р.Gly13Asp — 10,7% (6 из 56 больных), р.Gly12Ser — 8,9% (5 из 56 больных), р.Gly12Cys — 7,1% (4 из 56 больных), р.Gly12Ala — 5,4% (3 из 56 больных), р.Gly12Arg — 1,8% (1 из 56 больных). Ни в одном из случаев не были представлены 2 или более мутации одновременно.
В настоящем исследовании мутационный статус гена KRAS определили у 139 пациентов с КРР. Поскольку, по данным опубликованных к настоящему времени работ, 97–99% мутаций гена KRAS приходятся на 12-й и 13-й кодоны, и только 1–3% мутаций определяются в 61-м и 146-м кодонах [5, 11], мы ограничились исследованием наиболее частых аномалий. Несмотря на многократные изменения методики, более частыми, чем ожидалось, были неудачи в проведении тестирования — в 8 из 139 случаев (5,8% против менее 5% предполагаемых), что, по нашему мнению, отражает особенности гистологической проводки образцов опухоли в нашей стране. Мутации гена KRAS обнаружены в образцах опухоли у 56 (42,7%) из 131 больного. Полученные данные сопоставимы с результатами генотипирования других авторов, согласно которым частота мутаций находится в диапазоне 35–45% [3, 9]. Не выявлено отличий в частоте мутаций также и при сравнении с данными аналогичного исследования, проведенного в Национальном институте рака МЗ Украины с использованием альтернативного метода тестирования (p=0,7) [2].
Данные о спектре мутаций гена KRAS при КРР в различных исследованиях приведены в таблице. По результатам всех исследований лидирующие позиции в спектре занимает триплет мутаций р.Gly12Asp, р.Gly12Val, р.Gly13Asp. Хотя соотношения частот отдельных мутаций, по сообщениям разных авторов, несколько отличаются между собой, статистически значимых различий как по их частоте, так и по спектру между данными сравниваемых работ нет.
Таблица Результаты определения мутационного статуса гена KRAS в различных исследованиях
Источники:
Следующие статьи
- Тироидектомия и статины могут снизить риск офтальмопатии у пациентов, страдающих базедовой болезнью
- Трансплантация глаза полностью - в стадии разработки
- Тренировки, которые помогают восстановить зрение
Комментариев пока нет!
Поделитесь своим мнением